Annexe G

Glossaire des milieux
janvier 2006

Glossaire des bouillons, géloses et autres réactifs

Section W

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[Gélose Wagatsuma] (pour l'épreuve Kanagawa)

Milieu de base
Peptone	10,0 g
Chlorure de sodium (NaCl)	70,0 g
Extrait de levure	3,0 g
Phosphate dipotassique (K 2 HPO 4)	5,0 g
Mannitol	10,0 g
Gélose	15,0 g
Violet de gentiane	0,001 g
Eau distillée	1,0 L
pH 8,.0 ± 0,2
Supplément
Globules rouges frais (24h) humains ou de lapin avec anticoagulant	50,0 mL
Solution saline physiologique	200 - 250 mL

Milieu complet:

Ajouter les ingrédients du milieu de base dans 1.0 L d'eau distillée. Faire bouillir pour dissoudre la gélose. Ajuster le pH à 8,0 ± 0,2. Placer dans un bain à vapeur pendant 30 minutes. NE PAS STÉRILISER À L'AUTOCLAVE. Laisser refroidir à 45-50^oC.

Préparer le sang en mélangeant le sang frais (en dedans de 24 h du prélèvement) humain ou de lapin avec un volume équivalent ou supérieur de solution saline physiologique. Centrifuger à 4000 x g à 4^oC pendant 15 minutes. Décanter la saline et laver deux fois de plus. Après le troisième lavage, décanter la saline et resuspendre les globules avec de la saline pour atteindre le volume original.

Ajouter 50 mL de globules rouges lavés au milieu de base. Mélanger et verser dans des boîtes de Pétri stériles. Faire sécher complètement et utiliser rapidement.

[Gélose au sang anaérobie Wilkins Chalgren]

Milieu de base
Hydrolysât de caséine	10,0 g
Peptone de gélatine	10,0 g
Chlorure de sodium (NaCl)	5,0 g
Extrait de levure	5,0 g
Glucose	1,0 g
L-arginine	1,0 g
Pyruvate de sodium (C 3H 3O 3Na)	1,0 g
Hémine	5,0 mg
Ménadione (vitamine K)	0,5 mg
Gélose	10,0 g
Tween 80	1,0 mL
Eau distillée	950 mL
pH 7,1 ± 0,2
Supplément
Sang de cheval lysé	50,0 mL

Milieu complet:

Ajouter les ingrédients du milieu de base à l'eau distillée et porter le volume à 950 mL. Mélanger soigneusement et chauffer doucement pour dissoudre la gélose. Stériliser à 121^oC pendant 15 minutes et laisser refroidir à 50-55^oC. Ajouter aseptiquement 50,0 mL de sang de cheval lysé. Mélanger soigneusement et répartir dans des boîtes de Pétri stériles.

[Bouillon anaérobie Wilkins Chalgren]

Milieu de base
Hydrolysât de caséine	10,0 g
Peptone de gélatine	10,0 g
Chlorure de sodium (NaCl)	5,0 g
Extrait de levure	5,0 g
Glucose	1,0 g
L-arginine	1,0 g
Pyruvate de sodium (C 3H 3O 3Na)	1,0 g
Hémine	5,0 mg
Ménadione (vitamine K)	0,5 mg
Eau distillée	1,0 L
pH 7,1 ± 0,2

Milieu complet:

Dissoudre les ingrédients du milieu de base dans 1,0 L d'eau distillée. Mélanger soigneusement. Répartir dans des éprouvettes ou dans des flacons et stériliser à 121^oC pendant 15 minutes.