Supplément au glossaire des milieux (annexe G)

Direction générale des produits de santé et des aliments - Ottawa

Supplément à l'annexe G
Février 2004

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1. Application

Les renseignements qui suivent sont présentés à titre de supplément à toutes les méthodes pour la détection de E. coli O157 dans les aliments, les ingrédients alimentaires et les échantillons environnementaux et ils doivent être utilisés avec ces méthodes. Ce supplément vise à fournir des renseignements supplémentaires (tels que des sources de matériel, des étapes critiques, des étapes de confirmation ou des conseils utiles, etc.).

Les formulations fournies plus bas remplacent les formulations citées dans l'annexe G - Glossaire des milieux et doivent être utilisées avec toutes les méthodes du compendium pour la détection de E. coli O157.

Gélose HC modifiée (mHC)

Milieu de base
Tryptone	20,0 g
Sels biliaires no. 3	1,12 g
Chlorure de sodium	5,0 g
Sorbitol	20,0 g
4-Methylumbelliferyl- ß -D-glucuronide (MUG) (facultatif)	0,10 g
Violet de bromocrésol à 1,6 %	0,94 mL
Gélose	15,0 g
Eau distillée	1,0 L
pH 7,4 ± 0,2
Suppléments
* Cefsulodine à 1 % (1.0 g/100 ml)	1,0 mL
Tellurite de potassium à 0,1 % (0.1g/100ml)	2,5 mL

Milieu complet :

Suspendre les ingrédients de base dans 1,0 L d'eau distillée tout en agitant pour dissoudre les ingrédients (sauf la gélose) et ajuster le pH. Chauffer jusqu'à ébullition pour dissoudre la gélose. Stériliser à 121⁰C pendant 15 min. Laisser refroidir à 45- 50⁰C. Stériliser la cefsulodine par filtration et ajouter au milieu de manière aseptique. Faire tournoyer doucement le milieu (sans créer de bulles d'air) afin de bien répartir les suppléments. Faire sécher les géloses sous une hotte à flux laminaire afin d'enlever l'excès d'humidité. Conserver les géloses à 4⁰C pendant 2 semaines.

^* La cefsulodine n'est pas nécessaire si l'on utilise le bouillon d'enrichissement BEE.

Note: Les suppléments sont disponibles commercialement. Si l'on achète un produit reconstitué (forme liquide), assurer que la concentration finale dans le milieu ci-dessus est adéquate. Pour la gélose mHC, la concentration du tellurite de potassium est de 2.5 mg/L.

Gélose MacConkey sorbitol modifiée (MACSTCC)

Basal Medium (Gélose MacConkey sorbitol) Voir la Note plus bas
Peptone	Difco: 15,5 g [Oxoid: 20 g]
Protéose peptone	Difco: 3,0 g [Oxoid: 0 g]
Sorbitol	10,0 g
Sels biliaires no. 3	1,5 g
Chlorure de sodium	5,0 g
Rouge neutre	0,03 g
Violet de gentiane	0,001 g
Gélose	15,0 g
Eau distillée	1,0 L
pH 7,1 ± 0,2
Suppléments
* Cefsulodine à 1 % (1 .0 g/100ml)	1,0 mL
Cefixime (1.0 mg/ml)	50,0 µL
Tellurite de potassium à 0,1 % (0.1g/100ml)	2,5 mL

Milieu complet :

Suspendre les ingrédients de base dans 1,0 L d'eau distillée tout en agitant pour dissoudre les ingrédients (sauf la gélose) et ajuster le pH. Chauffer jusqu'à ébullition pour dissoudre la gélose. Stériliser à 121⁰C pendant 15 min. Laisser refroidir à 45- 50⁰C. Stériliser les suppléments par filtration et ajouter au milieu de manière aseptique. Faire tournoyer doucement le milieu (sans créer de bulles d'air) afin de bien répartir les suppléments. Distribuer aseptiquement le milieu dans les boîtes de Pétri et laisser solidifier. Faire sécher les boîtes sous une hotte à flux laminaire afin d'enlever l'excès d'humidité. Conserver les géloses à 4⁰C pendant 2 semaines.

^* La cefsulodine n'est pas nécessaire si l'on utilise le bouillon d'enrichissement BEE.

Note: Le milieu de base (gélose MacConkey sorbitol) est disponible commercialement chez plusieurs fabricants tels que BD-Difco et Oxoid. La formulation du milieu de base peut varier légèrement (comme ci-dessus) et peut être interchangeable. Si un milieu de base d'une autre source est utilisé, il incombe au superviseur du laboratoire d'en assurer l'équivalence.

Les suppléments sont disponibles commercialement. Si l'on achète un produit reconstitué (forme liquide), assurer que la concentration finale dans le milieu ci-dessus est adéquate. Pour la gélose MACSTCC, la concentration du tellurite de potassium est de 2.5 mg/L et du cefixime est de 0.050 mg/L.

Guide général pour la reconstitution des antibiotiques

Suivre les instructions d'entreposage tel qu'indiqué sur le vial par le fabricant puisque certains produits requièrent la réfrigération, d'autres requièrent la congélation et d'autres requièrent un entreposage dans un dessiccateur.

Après la reconstitution, les antibiotiques peuvent être entreposés pendant 2 semaines sous forme liquide dans un réfrigérateur et protégés de la lumière.

Note: Il incombe au superviseur du laboratoire de faire l'évaluation d'autres conditions d'entreposage ainsi que de la durée de vie utile.