Dénombrement des Bactéries Aérobiques Totales dans les Produits Alimentaires et Ingrédients par la Méthode "Compact Dry"

Procédure de laboratoire MFLP-10
decembre 2006

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le Comité des méthodes microbiologiques
Division de l'évaluation
Bureau des dangers microbiens
Direction des aliments
Repère postal : 2204A1
Ottawa (Ontario) K1A 0L2

Courriel : Don_Warburton@sc-hc.gc.ca

1. APPLICATION

Compact Dry is applicable for microbial testing. The plates can be used to test raw material as well as finished products like food, beverage, meat, cosmetics or others. The Compact Dry plates can also be used like contact plates for difficult area using the Compact Dry swab.

2. PRINCIPLE

Compact Dry « Compte total (CT), développé par la Compagnie HyServ GmbH & Co. KG, Uffing, Germany, » est un milieu chromogénique prêt à l'emploi pour la détection et le dénombrement total des bactéries viables. Compact Dry combine les caractéristiques avantageuses des milieux traditionnels et des milieux déshydratés sur film. Compact Dry CT est un milieu pour le dénombrement total des bactéries viables contenant un agar nutritif conventionnel. Un (1) mL d'un échantillon est déposé préalablement sur la plaque où il diffusera uniformément sur toute la surface du milieu. La plaque est ensuite incubée pour permettre la croissance bactérienne. Les colonies observables sur Compact Dry CT sont rouges dû à un indicateur Redox, le sel de tetrazolium. Les bactéries peuvent ensuite être prélevées pour des analyses supplémentaires.

3. DÉFINITION DES TERMES

Compact Dry CT est un milieu pour le dénombrement total des bactéries viables contenant un milieu nutritif conventionnel. Les colonies observables sur Compact Dry CT sont rouges dû à un indicateur redox, le sel de tetrazolium.

4. PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS

Voir Appendice B, volume 2.

5. MATÉRIEL ET ÉQUIPEMENT REQUIS

1) Plaques Compact Dry CT maintenues à la température de la pièce.

2) Notice d'utilisation incluant le mode opératoire.

3) Incubateur pouvant maintenir des températures comprises entre 20 et 42°C

6.0 PROCÉDURE

Effectuer les analyses en suivant les indications ci-après :

6.1 Prétraitement des échantillons

6.1.1. Dénombrement des bactéries viables dans l'eau ou les aliments liquides: Déposé un (1) mL d'échantillon au milieu de la plaque Compact Dry

6.1.2 Dénombrement des bactéries viables dans les aliments solides : Ajouter une solution tampon à l'échantillon et homogénéiser au broyeur. Déposé un (1) mL d'échantillon (diluer si nécessaire) au milieu de la plaque Compact Dry.

6.1.3 Dénombrement des bactéries viables dans les spécimens sur écouvillons : Utiliser un écouvillon pour prélever un échantillon de surface et l'introduire dans le contenant prévu à cet effet. Déposé un (1) mL de la solution (diluer si nécessaire) au milieu de la plaque Compact Dry. Il est recommandé d'utiliser des écouvillons de marque Compact Dry disponibles chez HyServe Id-No. 1 002 952/3 (40/400 pièces).

6.2 Procédure d'analyse

6.2.1 Retirer le couvercle et déposé un (1) mL d'échantillon au milieu de la plaque Compact Dry.

6.2.2 L'échantillon diffuse instantanément et uniformément à travers la membrane pour transformer rapidement celle-ci en un gel.

6.2.3 Remettre le couvercle sur la plaque et inscrire l'information requise sur la section prévue à cet effet.

6.2.4 Retournée la plaque et incubée celle-ci pour une période de 48 heures.

6.2.5 Suite à l'incubation, dénombrer les colonies colorées (rouges) sous la plaque. Un papier blanc placé sous la plaque aidera au dénombrement des colonies.

6.3 Lecture des résultats

6.3.1 Le dénombrement se fait immédiatement après la période d'incubation. Si la lecture doit se faire plus tard, déposer les plaques au congélateur. Cette dernière procédure devrait toutefois être évitée comme pratique courante.

6.3.2 Utiliser un compteur de colonie conventionnel pour dénombrer les bactéries. Une loupe avec lampe peut être utilisée pour faciliter le dénombrement.

6.3.3 La surface de croissance représente un cercle d'environ 20 cm². L'estimé du dénombrement sur des plaques contenant plus de 250 colonies peut être fait en comptant le nombre de colonies sur une ou plusieurs surfaces de 1 cm². La moyenne des résultats obtenus est alors multiplié par 20 pour obtenir l'estimé de la plaque totale.

6.3.4 Calculer le nombre de colonie par mL ou g à partir du nombre de colonies obtenues sur des plaques choisies à un niveau de dilution procurant des résultats significatifs.

6.3.5 Lors du dénombrement des colonies sur des duplicatas de plaques provenant de dilutions successives, l'utilisateur doit calculer le nombre moyen de colonies pour chaque dilution avant de déterminer un compte bactérien moyen.

6.3.6 Dans le but de procéder à une identification bactérienne, retirer le couvercle et prélever une colonie directement de la plaque.

6.4 Interprétation des résultats

6.4.1 Compter toutes les colonies rouges indépendamment de leur grosseur et de leur opacité. La majeure partie des colonies seront rouges. Toutes les colonies colorées font partie du compte total. La présence d'une concentration importante de colonies sur la plaque peut provoquer la coloration complète de la surface de croissance en rouge ou rose. Dans un tel cas, reporté le résultat comme « croissance confluente ». Occasionnellement, sur des plaques où la croissance est importante, il se peut que le centre de la plaque semble exempt de colonies visibles alors que celles-ci sont visibles sur les rebords de la plaque. Dans un tel cas, il faut reporter un résultat de « croissance confluente » requérant une dilution plus élevée de l'échantillon.

6.4.2 Certains microorganismes peuvent liquéfier le gel, leur permettant de s'étaler sur toute la surface de la plaque et masquer la présence d'autres colonies. Si un tel microorganisme vient interférer avec le dénombrement bactérien, un estimé doit être effectué sur une surface non-affectée par la liquéfaction du milieu.

7. Notes

7.1 Certaines colonies peuvent ne pas être distinctivement rouges.

7.2 Une concentration bactérienne élevée provoquera une coloration complète de la surface de croissance. Il faut alors diluer l'échantillon

7.3 Suite à son utilisation, disposer du produit selon les réglementations locales en vigueur.

7.4 La surface de croissance est de 20cm². Au dos de la plaque se trouve une grille avec des surfaces de 1cm X 1cm pour faciliter le dénombrement bactérien. Si la croissance bactérienne est trop abondante, un compte total de bactéries viables peut être obtenu en multipliant par 20 le compte moyen de bactéries obtenu sur plusieurs unités de surface individuelle de 1X1 cm.

7.5 Les plaques Compact Dry sont produites à un site certifié ISO 9001.

7.6 Validation AOAC No. 010404

8. RÉFÉRENCES

8.1 Nissui Pharmaceutical granted PTM status for Compact Dry TC, Inside Laboratory Management ; AOAC, July 2004:19-22.

8.2 Bachmann, B., Lüthi, M. 2003. Evaluation mikrobiologischer Methoden zur Prüfung von Trinkwasser im Feld für Katastropheneinsätze. Mitt. Lebensm. Hyg. 94: 579-593.

8.3 Ellis, P., Kirchhof, G., and Meldrum, R. 2003. Evaluation of the Compact Dry SL method for the detection of Salmonella in spiked food samples. Poster presentation at HPA 1st Scientific Conference, University of Warwick, September 2003.

8.4 Ellis, P. and Meldrum, R. 2002. Comparison of the Compact Dry TC and 3M Petrifilm ACP dry sheet media methods with the spiral plate method for the examination of randomly slected foods for aerobic colony count . J. Food Prot. 65: 423-425.

8.5 Ellis, P. and Meldrum, R. 2001. Evaluation of dryfilm methods for aerobic colony counts. Poster presentation at PHLS 26th Scientific Conference, University of Warwick, September 2001.

8.6 Mizuochi, S. and Kodaka, H. 2000. Evaluation of dry sheet medium culture plate (Compact Dry TC) method for determining numbers of bacteria in food samples . J. Food Prot. 63: 665-667.

8.7 Mizuochi, S., Kamiya, H., Kodaka, H., Sengoku, H., and Horigome, K. 1999. Compact Dry for the Enumeration of Bacteria in Food . ASM 1999 General Meeting, Chicago.

8.8 Kodaka, H. and Ishikawa, M. 1995. Evaluation of new medium with chromogenic substrates for members of the family Entero-bacteriaceae in urine samples . J. Clin. Microbiol. 33: 199-201.

8.9 Curiale, M.S. and Sons, T., et. al. 1991. Dry rehydratable film for enumeration of total coliforms and Escherichia coli in foods: Collaborative study . J. Assoc. Off. Anal. Chem. 74: 635-648.