Identification du listeria monocytogenes au moyen d'Accuprobe^md (Test «rapid DNA probe» d'Accuprobe)

Procédure de laboratoire MFLP-88
Juillet 2011

Certains hyperliens donnent accès à des sites d'un organisme qui n'est pas assujetti à la Loi sur les langues officielles. L'information qui s'y trouve est donc dans la langue du site.

Direction générale des produits desanté et des aliments
ottawa

Jeffrey M. Farber et Elaine Daley
Division de la recherche microbiologique
Bureau de dangers microbiens, Direction des aliments
DGPSA, localisateur postal 2204E
Ottawa (Ontario) K1A 0K9

Courriel: micro_methods_committee@hc-sc.gc.ca

1. Application

Cette méthode est applicable à l'identification rapide de Listeria monocytogenes afin de déterminer s'il y a conformité aux articles 4 et 7 de la Loi sur les aliments et drogues. Cette méthode a été validée pour l'utilisation avec des colonies isolées au moyen des méthodes MFLP-74, MFHPB-07, et MFHPB-30. Cette méthode révisée remplace la méthode MFLP-88 datée d'octobre 1996.

2. Principe

Le Test d'Identification de Listeria monocytogenes AccuProbe^MD est une méthode objective et rapide pour l'identification définitive de L. monocytogenes basée sur la détection de séquences spécifiques d'ARN ribosomique uniques à L. monocytogenes.

Les tests d'hybridation des acides nucléides sont basés sur la capacité de brins complémentaires d'acide nucléique de s'aligner de façon spécifique et de se lier pour former des complexes double-brins stables. Le système AccuProbe^MD utilise une sonde ADN simple-brin chimioluminescente, marquée à l'ester d'acridinium et complémentaire à l'ARN ribosomique de l'organisme cible. Lorsque la sonde ADN marquée s'hybride à l'ARN ribosomique de l'organisme ciblé pour former un hybride ADN:ARN stable, l'acridinium est protégé contre l'hydrolyse chimique et peut réagir avec le peroxyde d'hydrogène pour produire de la chimioluminescence. Si la sonde demeure libre, la liaison estérifiée est hydrolysée et rend l'acridinium non chimioluminescent de façon permanente. Les hybrides ADN:ARN marqués sont mesurés au moyen d'un luminomètre Gen-Probe. Une lecture de luminomètre égale ou supérieure à une valeur seuil détermine un résultat positif. Le temps requis pour complétér l'analyse est de moins d'une heure.

AccuProbe est une marque déposée de Gen-Probe Incorporated, San Diego, CA 92121.

3. Définition des termes

Voir l'annexe A du volume 3.

4. Prélèvement des échantillons

Voir l'annexe B du volume 3.

5. Matériel et équipement spécial

5.1 Les réactifs du Test d'Identification de Listeria monocytoges AccuProbe^MD sont fournis dans trois trousses de réactifs distinctes. Chaque trousse contient suffisamment de matériel pour 20 tests. La trousse est disponible à  Gen-Probe Incorporated, 9880 Campus Point Drive, Dan Diego, CA 92121 (téléphone 1-800-523-5001). www.gen-probe.com

5.1.1 AccuProbe Listeria monocytogenes Kit (numéro de catalogue 2920)

5.1.2 AccuProbe Culture Identification Reagent Kit (numéro de catalogue 2800)

5.1.3 AccuProbe Gene-Probe Detection Reagent Kit (numéro de catalogue 1791)

5.2 Luminomètre Gene-Probe

5.3 Équipement additionnel
Incubateur ou un bain (35 à 37°C)
Bloc chauffant (60 ± 1°C)
Micropipettes (50 et 300 µl)
Vortex

5.4 Les cultures témoins positives et négatives recommandées sont L. monocytogenes ATCC 35152 et L. grayi ATCC 19120 respectivement. Si ces cultures ne sont pas disponibles, d'autres souches ATCC reconnues de L. monocytogenes et d'espèces autres que monocytogenes peuvent servir de témoins positifs et négatifs respectivement.

6. Marche à suivre

Tous les autres renseignements spécifiques reliés au matériel, à l'équipement et aux procédures générales se trouvent dans la documentation jointe aux trousses d'analyse.

Une analyse faite à l'aide de AccuProbe^MD doit être effectuée à partir d'une colonie présomptive de L.monocytogenes isolée sur une gélose sélective (p.ex : gélose LPM, gélose au sang de mouton 5%).

7. Interprétation

Suivre les instructions du fabricant. Tous les résultats positifs sont plus grand que ou égale à la valeur seuil. Un résultat positif présomptif de L. monocytogenes doit être confirmé en suivant les instructions des méthodes MFHPB-07ou MFHPB-30.

8. Références

8.1 Pagotto, F., Hébert, K., J. Farber. 2011. Isolation of Listeria monocytogenes and other Listeria spp. from foods and environmental samples. In: Volume 2. The Compendium of Analytical Methods. http://www.hc-sc.gc.ca/food-aliment.

8.2 Warburton, D., Boville, A., Pagotto, F., Daley, E. and Chow, C. 2011. The Isolation of Listeria monocytogenes and other Listeria spp. from foods and environmental samples using palcam broth. In: Volume 2. The Compendium of Analytical Methods. http://www.hc-sc.gc.ca/food-aliment.

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