Deuxième atelier sur les méthodologies d'analyse des allergènes alimentaires

Du 27 au 29 octobre 2003
Ottawa, Ontario, Canada

Le bureau d'innocuité des produits chimiques de la direction des aliments de Santé Canada a organisé le second atelier sur les méthodologies d'analyse des allergènes alimentaires du 27 au 29 octobre 2003, en collaboration avec l'agence canadienne d'inspection des aliments (ACIA).
Cette seconde édition intervient comme un suivi à l'atelier 2002 co-organisé par Santé Canada, l'ACIA en collaboration avec des chercheurs de la US Food and Drug Administration (CFSAN).
L'atelier a eu pour principaux objectifs de promouvoir la consultation, l'échange d'information et l'harmonisation des méthodes d'analyse des allergènes alimentaires.

La session 2003 a rassemblé plus de 75 participants : scientifiques, chimistes et analystes des organismes gouvernementaux, des universités, de l'industrie et des associations de consommateurs. Les questions liées à la détection, l'identification et la caractérisation des allergènes dans les aliments ont été présentées et discutées :

• Développement/évaluation et validation de méthodes d'analyse
• Gestion du risque/ Évaluation du risque - Impact sur le développement de méthodologies d'analyse
• Développement de standards de référence
• Techniques de confirmations
• Harmonisation des méthodologies

La présentation principale a été effectuée par Dr Sue Hefle, Co-Directeur du Food Allergen Research and Resource Program (FARRP) de l'université du Nebraska ÉU et a porté sur les "questions entourant la détection d'allergènes dans les aliments aux États-Unis.". Une vue d'ensemble sur l'environnement réglementaire et sur l'application des méthodologies de détection des allergènes dans le cadre de la mise en force des lois et règlements sur les aliments a été présentée. Plusieurs auteurs ont abordé les aspects liés au développement et à la validation de méthodes d'analyse des allergènes dans les aliments. L'harmonisation de méthodes et leur utilisation pour évaluer l'allergénicité des protéines résultant d'organismes génétiquement modifiés ont été également discutées.

Le programme de recherches sur les méthodes de détection des allergènes dans les aliments de Santé Canada a présenté ses dernières réalisations en méthodes développées et transférées aux laboratoires de l'ACIA, notamment les trousses de diagnostic ELISA visant à détecter des protéines de noisette et de tropomyosine de crustacés ainsi qu'une méthode multi-résidus détectant l'arachide et quatre noix. Le programme de validation de méthodes, mis en oeuvre conjointement avec les laboratoires de l'ACIA a permis de compléter la première évaluation multi-laboratoires d'une méthodologie développée à l'interne par Santé Canada et visant les marqueurs de noisette. Cette validation de méthode sert comme préambule à son entrée dans le recueil de méthodologies d'analyse des allergènes alimentaires de Santé Canada, développé sous l'égide du comité conjoint SC/ACIA sur les méthodes de détermination des allergènes alimentaires (CMA). Des efforts de développement de techniques de confirmation ont été également illustrés par les derniers résultats sur une l'utilisation de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse (CL-SM/SM) pour l'identification de marqueurs de protéines/peptides des allergènes d'arachide. Les laboratoires d'analyse de l'ACIA ont rendu compte de leurs efforts croissants d'introduction de nouveaux outils d'analyse, permettant l'accroissement de la capacité de l'agence dans le domaine de la détermination des allergènes non-déclarés dans les aliments.

Plusieurs représentants de l'industrie du diagnostic ont passée en revue leurs dernières trousses d'analyse rapide couvrant une palette variée d'allergènes prioritaires tels les oeufs, le gluten/gliadine, les protéines de lait. La US FDA et l'institut de recherche de l'AOAC (AOAC RI) ont présenté les résultats de validation de trois trousses d'analyse disponibles commercialement et visant les arachides. Des détails sur les résultats d'une initiative similaire au sein de l'Union Européenne (l'EU) ont été présentés par le directeur adjoint de l'institut des matériaux de référence et de mesure (IRMM, EU JRC), Dr Elke Anklam.

Les techniques émergentes visant la détermination des allergènes ainsi que de nouveaux outils de confirmation de résultats obtenus par ELISA ont été illustrés par la description de méthodes PCR et les avancées sur l'utilisation d'immuno-capteurs aux fins de détermination des allergènes dans les aliments. Une méthode d'analyse basée sur l'ATP, et pouvant être employée dans le contexte de la vérification de la salubrité des lignes de transformation des aliments a également été présentée. D'autres rapports ont décrit des travaux focalisant sur la caractérisation des allergènes alimentaires et l'application des résultats à l'étude de l'allergénicité des protéines issues des organismes génétiquement modifiés. Les résumés des présentations effectuées dans le cadre du programme technique accompagnent ce rapport et sont publiés sur le site du programme des allergènes de Santé Canada.

L'atelier a également accueilli une session spéciale du groupe travail initié par la présidence de l'AOAC International sur les allergènes alimentaires, traitant des standards de référence et de la validation de méthodologies d'analyse.

Le besoin de standards de référence pour l'évaluation /validation des méthodologies d'analyse des allergènes alimentaires

Un consensus a été atteint quant à la nécessité de développer des standards de référence pour les allergènes prioritaires, afin d'y avoir recours pour évaluer la performance des techniques analytiques de détermination des allergènes alimentaires et de mieux comprendre la signification des résultats analytiques, en terme de gestion du risque encouru par le consommateur. Des discussions ont eu lieu sur la façon de définir un standard de référence pour un allergène alimentaire donné et s'il devait y avoir un ou plusieurs matériels représentant chacun des allergènes prioritaires.

Le CMA canadien a partagé sa définition courante d'un « standard de référence » à employer dans le contexte de l'évaluation/ validation de méthodes comme étant « un matériel représentatif de la denrée allergène, qui est pleinement caractérisé, et qui pourrait être produit /fourni de façon reproductible ». En utilisant ce point de départ le CMA s'est engagé à collaborer activement dans tout projet visant l'harmonisation et le développement de standards là où c'est applicable et à l'initiative de l'IRMM, de FARRP ou de la US FDA. De tels efforts sont illustrés par l'utilisation d'un beurre d'arachide standardisé et fourni par NIST pour la validation de kits commerciaux de détermination d'arachide, ainsi que par les derniers efforts de l'IRMM/EU JRC de développer et caractériser un matériel représentant l'arachide comme denrée, en tenant compte des principales variétés cultivées, tout en considérant les divers processus de traitement thermique. Le groupe a identifié certaines actions à concrétiser dans la période à venir et qui se résument comme suit :

• Identifier les priorités du développement de matériaux de référence basés sur les nécessités actuelles et les efforts en cours en terme de validation de méthodes d'analyse.
• Identifier et répertorier les standards de référence existants et ceux en cours de développement par les instituts de référence (NIST, IRMM, agriculture Canada etc..) qui pourraient répondre aux critères de matériaux de référence pour les allergènes prioritaires.
• Là où aucun standard de référence n'a été identifié, initier les actions appropriées pour le développement d'un tel standard en faisant appel aux ressources combinées de tous les groupes présents.

Validation des méthodes d'analyse des allergènes alimentaires

La nécessité d'élaborer des critères harmonieux et constants pour la validation de méthodes d'analyse des allergènes alimentaires a été réitérée. De tels critères sont mis en place pour mieux aider l'utilisateur à interpréter les résultats obtenus grâce aux différentes techniques de détection, afin de mieux cerner le risque encouru par les consommateurs allergiques.

Les efforts récents de la validation des kits commerciaux d'arachide par l'institut de recherche de l'AOAC, ont été discutés. L'AMC canadien a partagé le processus selon lequel les méthodologies de détection d'allergènes alimentaires sont évaluées/validées, avant d'être employées dans la mise en force de la réglementation en cours par l'ACIA. En plus des approches internes et propre à chaque laboratoire de l'ACIA, de validation systématique de méthodes d'analyse utilisées à fins réglementaires et faisant partie intégrante des procédés de contrôle qualité (CQ), le lancement du recueil de méthodologies d'analyse des allergènes alimentaires a mené au développement d'un ensemble de critères pour l'introduction de ces méthodes dans le dit recueil. Le CMA a partagé les principes généraux qui régissent ces critères :

• Le recueil vise à compiler et rapporter la performance des méthodes qui ont été évaluées selon le protocole établi. Il n'endossera pas ou n'approuvera pas ces méthodes.
• Le protocole d'évaluation sera conçu et mis en application en collaboration totale avec le concepteur/auteur de la méthode, que ce soit un industriel privé du diagnostic, une équipe universitaire ou de recherche gouvernementale.
• Deux niveaux d'évaluation seront visés : un niveau d'entrée, où une méthode est évaluée par un seul laboratoire affilié au CMA ainsi que par celui du concepteur de l'étude, et le niveau approfondi d'évaluation, où les résultats sont produits par au moins trois laboratoires affiliés au CMA tout en incluant aussi les laboratoires de l'auteur de la méthode.
• Un standard de référence devra être défini à des fins de l'évaluation de la méthode. Ce standard devra être désigné en suivant les critères de choix du matériel de référence définis plus haut et en tenant compte que ce matériel devra servir à l'évaluation de plus d'une méthode visant l'allergène étudié (permettant ainsi la comparaison possible entre méthodes là où cela est applicable).
• Les niveaux de fortification et les matrices alimentaires à étudier devront être définis selon les déclarations de l'auteur de la méthode; typiquement, 3 niveaux de fortification seront évalués, un blanc, 2xLOQ et 5xLOQ.
• Le nombre de réplicats a été défini de sorte que le processus d'évaluation/validation n'affecte pas négativement les activités des laboratoires participants, dont la mission première est de produire des analyses en réponse aux plaintes de consommateurs et dans le cadre des activités de mise en force des règlements. Il a donc fallu trouver un équilibre entre une démonstration valable de la reproductibilité et de la robustesse de la méthode et un nombre d'analyses qui ne paralyse pas le laboratoire impliqué.
• Le résultat des travaux effectués seront compilés dans un rapport de performance de la méthode et seront publiés sur le site Web de Santé Canada dans le recueil de méthodes sur les allergènes alimentaires. Ce rapport rend possible la mise à disposition de données sur la performance et l'applicabilité des méthodologies existantes, permettant aux utilisateurs de la communauté analytique de faire leur choix selon leurs besoins.
• Les données produites seront partagées en accord avec toutes les parties impliquées, y compris le concepteur / auteur de la méthode.
• Les laboratoires fédéraux sont libres d'utiliser les méthodes d'analyse qu'ils considèrent plus appropriées à leur besoin. Ce choix ne sera pas rendu public sur le site web, ni dans le recueil de méthodes, du fait qu'il est sujet à changement et qu'il peut-être interprété comme une approbation d'une méthode donnée plutôt qu'une autre.

A la question demandant si "le processus canadien" actuel ne conduirait pas à la duplication d'efforts soutenus à l'échelle internationale notamment par les activités de l'AOAC RI, le CMA répond qu'il adopte une approche de collaboration ouverte. Tout processus de validation /évaluation auquel les laboratoires affiliés au CMA sont invités à participer (comme cela a été le cas lors de l'évaluation des trousses arachide par l'AOAC RI/US FDA) et dont les critères satisfont aux besoins du CMA, sera automatiquement considéré valide aux yeux du CMA. Les méthodes correspondantes seront donc acceptées directement dans le recueil des méthodes du CMA avec la publication du rapport de performance correspondant une fois les autorisations nécessaires auront été obtenues.

Le groupe de discussions a considéré établir une priorité dans la mise en oeuvre d'efforts concertés pour la validation de méthodes d'analyse des allergènes alimentaires ainsi que pour le développement de méthodes alternatives aux techniques ELISA à des fins de confirmation, sous l'égide du groupe de travail de l'AOAC. Les deux co-présidents du groupe enverront un appel à participation à tous les membres du groupe pour initier ce processus.

Le CMA canadien a annoncé qu'il continuerait son initiative d'organiser régulièrement un atelier de travail rendant compte des avancées effectuées dans le domaine du développement de méthodes d'analyse des allergènes alimentaires, en association avec des collaborateurs nationaux et internationaux parmi des organismes de normalisation ainsi que les leaders de la communauté analytique et notamment FARRP. Une date tentative pour le prochain atelier a été fixée pour le printemps 2005.